Setting: The Cornell model of murine tuberculosis has proved useful for demonstrating and studying dormancy. However, it has not previously been used to investigate the molecular aspects of dormancy.
Objective: To obtain a profile of the amount of Mycobacterium tuberculosis DNA at various stages of the Cornell model.
Design: BALB/C mice were infected intravenously with 2.7 × 106 cfu M. tuberculosis strain H37Rv; they were left for two weeks, treated for 14 weeks with isoniazid and pyrazinamide and left untreated for a further 14 weeks. Spleens and lungs at start of treatment and at 8, 12, 14, 18, 24 and 28 weeks thereafter were examined by culture, and DNA in tissue homogenates was quantitated by polymerase chain reaction (PCR) and dot blot hybridisation.
Results: Culture and quantitative PCR estimated initial bacillary content at about 107 per organ. Thereafter, organ cultures rapidly declined and were usually negative between 14 and 28 weeks. However, during this period quantitative PCR consistently estimated about 5.5 log10 bacilli equivalents in spleens and lungs. Dot blot hybridisation sensitive to about 10 ng bacillary DNA was usually positive pretreatment and occasionally during and after treatment, hence confirming the PCR results.
Conclusions: There is persistence of significant quantities of M. tuberculosis DNA throughout the various stages of the model. This may represent dead bacilli, free DNA or dormant forms.
Cadre: Le modèle de Cornell de la tuberculose murine s'est avéré utile dans la mise en évidence et l'étude de l'inactivité. Néanmoins il n'avait pas été utilisé jusqu'ici pour l'évaluation des aspects moléculaires de l'inactivité.
Objet: Obtenir un profil du taux d'ADN de Mycobacterium tuberculosis aux différents stades du modèle de Cornell.
Schéma: Des souris BALB/C ont été infectées par voie intraveineuse avec 2,7 × 106 unités formant colonies (ufc) de la souche H37Rv de M. tuberculosis; elles ont été laissées pendant deux semaines, puis traitées pendant 14 semaines avec isoniazide et pyrazinamide, et ensuite laissées de nouveau sans traitement pendant 14 semaines. Les rates et les poumons au début du traitement et à 8, 12, 14, 18, 24 et 28 semaines après traitement ont été examinés en culture, et l'ADN dans des homogénats tissulaires a été quantifié par PCR et par hybridation ‘dot blot’.
Résultats: Le contenu bacillaire initial a été estimé à 107 par organe, en culture et en PCR quantitative. Les cultures des organes ont ensuite rapidement décliné, étant négatives pour la plupart entre les 14e et 28e semaines. Pourtant, au cours de cette période la PCR quantitative a régulièrement estimé des équivalences bacillaires de 5,5 log10 dans les rates et les poumons. Une hybridation ‘dot blot’ sensible à 10 ng ADN bacillaire était normalement positive avant traitement et occasionnellement pendant et après traitement, fournissant ainsi une confirmation des résultats de la PCR.
Conclusion: Il existe une persistance des quantités significatives de ADN M. tuberculosis aux différents stades du modèle. Ceci pourrait représenter des bacilles morts, de l'ADN libre ou des formes inactives.
Marco de referencia: El modelo de Cornell de la tuberculosis murina se ha mostrado útil para demostrar y estudiar la quiescencia bacteriana. Sin embargo, hasta aquí, no había sido utilizado para la evaluación de los aspectos moleculares de la quiescencia.
Objetivo: Obtener un perfil de la cantidad de ADN de Mycobacterium tuberculosis en los diferentes estadios del modelo de Cornell.
Método: Se infectaron ratones BALB/C por via intravenosa con 2,7 x 106 unidades que forman colonias (ufc) de la cepa H37Rv de M. tuberculosis; éstos se dejaron por dos semanas sin tratamiento, enseguida fueron tratados durante 14 semanas con isoniacida y pirazinamida, luego se dejaron nuevamente sin tratamiento durante 14 semanas. Se examinó por cultivo el bazo y el pulmón al comienzo del tratamiento y a las 8, 12, 14, 18, 24 y 28 semanas después de tratamiento y se cuantificó el ADN en los homogeneizados tisulares por PCR y por hibridación ‘dot blot’.
Resultados: El contenido bacilar inicial fue estimado en 107 por órgano, en cultivo y en PCR cuantitativa. Los cultivos de los órganos disminuyeron rápidamente, siendo negativos para la mayor parte entre la 14a y la 28a semana. Sin embargo, en el transcurso de este periodo, la PCR cuantitativa estimó regularmente equivalencias bacilares de 5,5 log10 en el bazo y en los pulmones. Una hibridación 'dot blot' sensible a 10 ng de ADN bacilar era normalmente positiva antes del tratamiento y ocasionalmente durante y después del tratamiento, dando así una confirmación de los resultados de la PCR.
Conclusión: Existe una persistencia de las cantidades significativas de ADN de M. tuberculosis en los diferentes estadios del modelo. Esto podría representar bacilos muertos, ADN libre o formas quiescentes.